食用菌生产中的灭菌和消毒是有本质区别的,灭菌是杀死杂菌及其芽孢的过程,消毒是杀死食用菌表面部分病原微生物的过程。本文介绍一下食用菌母种培养基的灭菌方法与步骤,供参考。
在食用菌母种培养基制作中常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法,它是最常用而且灭菌最彻底的一种方法。具体方法步骤及注意事项如下:
选用手提式高压蒸汽灭菌锅,向灭菌锅内加水至水位标记高度。注意:水不可过多也不可过少,过少易烧干:过多棉塞易受潮,引起杂菌污染。
把培养基有序竖直排放人灭菌锅内,留开通气孔,并保证蒸汽流通。试管口和棉塞不能直接接触锅壁,上面要盖2层报纸或1层防水油纸,防止锅盖下面的冷凝水打湿棉塞。
最后均匀拧紧锅盖上的螺丝,勿使漏气。
将装入培养基的灭菌锅放置在2-3千瓦的电炉上进行加热,当压力升至0.05兆帕时,打开放气阀缓慢放气,让压力降至零,再放气10-15分钟,当有大量热蒸汽排出时,关闭放气阀升压灭菌。
当压力升至0.11-0.12兆帕时,开始计时,并调节火力大小,始终维持所需压力30分钟。
在0.11-0.12兆帕压力下.灭菌30分钟后,停止加温,待压力自然下降到0时打开放气阀,缓慢排出残留蒸汽;然后打开锅盖,待热蒸汽冷却片刻后,取出灭菌物品。
灭菌完后,若连续使用,应注意补足水分后再用。若暂时不用,应排出锅内剩余水分,清理干净,下次备用。
首先将接种箱、接种室或者接种帐的卫生打扫干净;然后放人所有用具及母种培养基,用甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒。药品用量为每立方米甲醛10毫升,高锰酸钾5克。
熏蒸后的接种箱、接种室或者接种帐还可用紫外线辅助杀菌,一般10立方米的空间,用30瓦的紫外线灯照射30分钟,待臭氧散去,即可开始接种。
若采用超净工作台接种,首先要将超净工作台用清洁的水和干净的抹布擦洗干净,然后再用75%的酒精擦拭,放人接种用具和母种培养基,开机吹无菌风30分钟。
通过加温、通风、洒水、遮光等方法,保持培养室(箱)温度20℃-24℃;空气相对湿度在60%左右;暗光;空气新鲜,促使菌丝健壮生长。经2-3天,即可在接种块上萌发出大量菌丝,经7-10天即可长满培养基斜面。
在培养期间每隔2-3天检查一次菌丝生长情况,若发现有杂菌污染或生长不正常的试管,立即挑出并淘汰。
长满的菌种可用于进一步扩繁,若暂时不用可放置在20℃-40℃的冰箱中冷藏备用。
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